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免疫熒光染色之染色的注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2016-08-09      瀏覽次數(shù):2807

一:熒光抗體染色

 

于已固定的標(biāo)本上滴加經(jīng)適當(dāng)稀釋的熒光抗體。置濕盒內(nèi),在一定溫度下溫育一定時(shí)間,一般可用
25~37℃ 30min,不耐熱抗原的檢測(cè)則以4℃過(guò)一夜為宜。用PBS 充分洗滌干燥。

 

熒光顯微鏡檢查應(yīng)在通風(fēng)良好的暗室內(nèi)進(jìn)行。經(jīng)熒光抗體染色的標(biāo)本應(yīng)在染色當(dāng)天鏡檢,每次鏡下觀察時(shí)間以1~ 2h 為宜,時(shí)間過(guò)長(zhǎng)將使高壓汞燈的發(fā)光亮度下降,熒光減弱,工作人員觀察過(guò)久對(duì)眼睛也有不良影響。作油鏡檢查時(shí),必須用無(wú)自發(fā)熒光的鏡油。

 

二:影響熒光抗體染色的各種因素

 

. pH   熒光素在溶劑中基本上處于離子化狀態(tài),因此,溶劑中的氫離子濃度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響是極大的。每一種熒光素都有自己合適的pH值,它保持熒光素分子與溶劑之間的電離平衡。pH的改變可以引起熒光素?zé)晒夤庾V的改變,并可造成熒光強(qiáng)度的降低。

 

. 溫度   一般情況下,環(huán)境溫度的升高對(duì)熒光染色有明顯的影響。因?yàn)?,溫度升高可造成溶液粘滯性增加,溶劑和熒光素分子的?dòng)力增大,使熒光淬滅的可能性隨之加大,這就使熒光素分子與其他分子之間的相互碰撞幾率增加,因此,影響了熒光素的熒光強(qiáng)度。一般情況下,溫度在20℃時(shí),熒光素即開(kāi)始表現(xiàn)溫度淬滅作用。隨溫度升高,熒光淬滅作用就越強(qiáng),可至熒光*淬滅。溫度在20℃以下,熒光素的熒光強(qiáng)度隨溫度的變化改變不明顯,基本上保持恒量。因此,在適當(dāng)?shù)牡蜏丨h(huán)境中進(jìn)行熒光顯微觀察,可得到更好的效果。

 

. 熒光素的濃度   在溶液濃度較稀時(shí),熒光強(qiáng)度隨熒光素濃度增加而增加。當(dāng)熒光素濃度增加到一定程度時(shí),熒光強(qiáng)度達(dá)到zui大。再繼續(xù)增加濃度,熒光素發(fā)生的光可能被鄰近的分子吸收,使熒光強(qiáng)度下降。

 

. 某些細(xì)胞固定劑對(duì)熒光素有明顯影響   如甲醛固定的細(xì)胞比不固定的細(xì)胞熒光強(qiáng)度減弱50%左右。雖然醇類(lèi)固定劑也有輕微的淬滅熒光作用,但其影響較小。

 

. 非特異性熒光染色   免疫熒光染色除特異性熒光之外,還出現(xiàn)一些與靶抗原-抗體反應(yīng)無(wú)關(guān)的熒光,統(tǒng)稱(chēng)為非特異性熒光。非特異性熒光染色可由于某些抗原的自發(fā)熒光及交叉反應(yīng)等多種因素產(chǎn)生。有些非特異性熒光染色可通過(guò)對(duì)照進(jìn)行鑒別與排除,有些則要通過(guò)對(duì)抗原的純化、抗體的提純、提高熒光抗體結(jié)合物的比例等方面尋找原因逐項(xiàng)清除。

上海信帆生物公司主要代理產(chǎn)品:
ELISA試劑盒:進(jìn)口ELISA試劑盒,國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基:微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清:胎牛血清,科研血清,動(dòng)物血清,NQBB,Hyclone,Gbico原裝血清 。
生物試劑:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進(jìn)口試劑。
標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品:進(jìn)口對(duì)照品,進(jìn)口對(duì)照藥材,進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品.
抗體:一抗,二抗,流式抗體等。
放免代測(cè)服務(wù):進(jìn)口放免代測(cè)服務(wù),國(guó)產(chǎn)放免代測(cè)服務(wù),進(jìn)口美國(guó)鳳凰等放免代測(cè)服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)室代測(cè)服務(wù):放免代測(cè),WB實(shí)驗(yàn),免疫組化代測(cè),熒光定量PCR代測(cè),病理細(xì)胞染色代測(cè),生化實(shí)驗(yàn)代測(cè)等。

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